派坤学苑|天津大学免疫胶体金技术培训基地

（天津大学-派坤生物联合实验室）

    在刚刚过去的半个世纪里，大多数的免疫检测需要昂贵分析设备和仪器，并且要专业人员操作检测。虽然这些昂贵的检测方法具有很高的灵敏度和特异性，但却因为昂贵、不方便携带、专业性等原因，而无法满足人们健康保障的日常需求。胶体金免疫层析诊断技术是根据免疫反应原理、利用大孔径微孔滤膜为载体、以胶体金做为固相标记物，来定性、半定量或定量检测样本中待测物质的一种侧流快速免疫分析技术。它是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、免疫层析技术及胶体金显色技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。近年来发展迅速，目前已经在农业、畜牧业、环境检测、尤其是在医学检验中得到了广泛应用。胶体金快速诊断试剂已经成为近年来生物产业化最成功的产品之一。

图1. 胶体金免疫层析试剂条结构功能区

　　派坤生物率先在中国建立起产品门类齐全的胶体金免疫层析诊断技术的研发、生产基地以及带领业内同行共同搭建起胶体金快检技术咨询平台:天津大学-派坤生物联合实验室,为国内有望介入该领域的生物和医药公司提供政策咨询、行业分析和技术输出等CRO相关服务，并提供自制的胶体金相关设备、材料、试剂以及参与国内胶体金新兴应用领域的项目合作。我们的实践表明，在国外设立研发中心或者直接引进国外胶体金免疫层析技术以提高企业的研发能力和稳定原料供应，在国内设立生产基地以利用低廉的人力资源是国内企业比较可行的发展途径。  

• 胶体金免疫层析试剂技术咨询、 现场培训

• 胶体金免疫层析试剂委托研发和技术转让

• 胶体金法体外诊断试剂生产许可证代理申报

• 胶体金法体外诊断试剂经营许可证代理申报

• 胶体金法体外诊断试剂批准文号代理申报

• 胶体金法体外诊断试剂GMP认证咨询

• 胶体金法体外诊断试剂基金申请咨询

• 胶体金法体外诊断试剂高新技术企业申报咨询

• 胶体金法体外诊断试剂厂房、车间设计

• 胶体金法体外诊断试剂质量体系文件及各部门岗位SOP

• 胶体金免疫层析试剂OEM委托生产及供应大板

• 胶体金免疫层析试剂全套生产设备

• 胶体金免疫层析试剂全套生产耗材

• 胶体金试剂及抗原、抗体试剂

• 胶体金法体外诊断试剂立项建厂咨询

一、 胶体金法体外诊断产品批准文号代理申报                                        

    我公司提供体外诊断试剂注册全过程的咨询及服务，包括产品注册策划、样品试制、产品检测、产品的临床试验、临床试验单位选择、临床试验数据的收集和整理、临床试验总结报告的起草、原始技术资料汇总及整理、申报资料汇总、申报资料、标准品准备、审评审批过程跟踪等。

    包括所有剂型（含酶联免疫法、化学发光法、免疫层析法、PCR法、蛋白芯片法、生化法等）的体外诊断试剂（IVD: In Vitro Diagnostic reagents）的国产和进口注册代理咨询服务，具体包括：

    1.国产诊断试剂产品注册服务内容包括：原始研究记录的整理、审核、申报、跟进；申报资料的起草、审核；标准品建立、临床试验单位选择、临床试验方案制定、临床试验协调、临床试验数据收集统计分析、临床试验报告编写、补充资料整理、批件领取、代理产品送检等等。

    2.进口诊断试剂产品注册服务内容包括：国外资料的翻译、整理、审核、申报、跟进、样品送检、临床试验单位选择、临床试验方案制定、临床试验协调、临床试验数据收集统计分析、临床试验报告编写、补充资料整理、批件领取、产品送检等等。

     派坤生物在医药,医疗器械生产、药物分析、质量控制系统（QCU）、资料整理及翻译、申请文件编制、GMP符合性实践、接受现场检查等过程中具有丰富的实践经验。可以接受体外诊断试剂类药品和医疗器械产品的代理注册业务。公司在为政府、学会、协会长期的服务过程中，与其建立了良好的协作关系，因此本公司能随时了解和掌握国家药品食品监督管理局在医疗器械注册方面的前沿信息和最新政策，一次注册成功率高。

     体外诊断试剂的种类主要有： 胶体金、酶免、生化试剂、PCR、放免 。按现行国家规定，分属药品注册管理及医疗器械管理。具体到胶体金法体外诊断试剂，其归属于二类、三类医疗器械的产品申报材料主要包括：    

    1.注册申请表：
    包括首次注册申请表、再注册申请表、补充注册申请表。申请人应根据申请注册的情况填写申请表。

    2.证明性文件：
    2.1申请人营业执照副本及生产企业许可证复印件（所申请产品应当在生产企业许可证核定的生产范围之内）。
    2.2质量体系考核（认证）的有效证明文件复印件：应提交《体外诊断试剂生产实施细则》检查验收报告。首次注册 时为现场考核报告，再注册时为全面质量体系考核（认证）报告。
    注：第一类产品不需提供2.2项证明文件。
    2.3所提交资料真实性的声明。

    3.综述资料：
    3.1产品的预期用途：产品的预期用途，与预期用途相关的临床适应症背景情况，如临床适应症的发生率、易感人群等，相关的临床或实验室诊断方法等。
    3.2产品描述：包括产品所采用的技术原理，主要原材料的来源及制备方法，主要生产工艺过程，质控品、标准品(校准品)的制备方法及溯源情况，有关产品主要研究结果的总结和评价。
    3.3有关生物安全性方面的说明：由于体外诊断试剂中的主要原材料可能是由各种动物、病原体、人源的组织和液体等生物材料经处理或添加某些物质制备而成，为保证产品在运输、使用过程中对使用者和环境的安全，对上述原材料进行灭活等保证其生物安全性方法的说明。
    3.4其他：包括同类产品在国内外批准上市的情况。相关产品所采用的技术方法及临床应用情况，本品与国内外同类产品的异同等。
    对于新诊断试剂产品，需提供被测物与预期适用的临床适应症之间关系的文献资料。

    4.产品说明书：
    应符合《医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定》的规定，并参考有关技术指导原则编写。

    5.注册产品标准及编制说明：
    注册产品标准的文本及编制说明应符合《医疗器械标准管理办法》的相关规定。对于第三类产品其注册产品标准的内容应参考《生物制品规程》设置。

    6.注册检测报告：
    由国家食品药品监督管理局认可的检测机构出具的注册检测报告。

    7.关于主要原材料的研究资料：
    与产品最密切相关的主要原材料，包括：抗原、抗体、质控品、标准品（校准品）的选择、制备及质量标准的研究确定。质控品、标准品(校准品)的定值试验资料等。

    8.关于主要生产工艺及反应体系的研究资料：
主要生产工艺包括：固相载体的生产工艺、显色系统的生产工艺等。反应体系包括：样本采集及处理、样本用量、试剂用量、反应条件、校准方法（如果需要）、质控方法等的研究确定。

    9.性能评估资料：
包括：分析灵敏度、分析特异性、检测范围、准确性、精密度，临界值（参考值及参考范围）的确定、与同类产品的比较等试验资料。

    10.稳定性研究资料：
包括至少三批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的试验资料，以及加速破坏性试验资料。

    11.临床研究资料：
    应参考有关技术指导原则开展临床研究，并提供临床研究资料。
    11.1有关伦理学方面说明：一般情况下，无需进行伦理委员会的审评及其签署知情同意书。但对其测定样本的获得较困难，并对人体具有潜在的危险性，如羊水、胸水、腹水、组织液、脑积液、组织切片等，需提交伦理委员会有关取样的合理性等方面的审查意见及知情同意书。
    11.2各临床研究单位的临床研究报告、对所有临床研究结果的总结报告。各临床研究机构的报告需加盖研究机构公章。
    11.3附件：临床研究的详细试验资料。有关临床研究中所采用的试验方法或其他诊断试剂产品的信息，包括试验方法和产品来源、说明书。产品的注册情况等。

    12.生产及检定记录：
    提供连续三批产品的生产及检定记录复印件。

    13.包装、标签样稿：
    应符合《医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定》的规定。

    本公司有丰富的申报经验及通畅的渠道，可提供编写申报材料、临床考核等等的一条龙服务，现已为不同的客户成功申报 10 余个品种。尤其是在胶体金法诊断试剂报批方面本公司具有以下优势:

    1 配备胶体金法诊断试剂注册专员，精通此类产品申报程序，能合理安排申报流程计划，使 报批时间最短

    2 经历了胶体金法诊断试剂从药品管理到医疗器械管理的变革，熟悉政策，熟悉撰写文件的技术要求。

    3 熟悉相关法规，避免违规行为导致的时间拖延；多重审核，层层把关，减少不必要的误差。

    4 对审报资料能做到完善合理，减少评审驳回的可能性，可减少重新复核，检验和二次申报时间。

    5 代理申报成功率高，可减少二次检验，二次申报费用。  

    欢迎前来咨询、洽谈。            

二、胶体金免疫层析全套生产设备

    派坤生物引进和吸收国外品牌的胶体金研发、生产设备的优点，结合公司自身科研开发和生产实际需要，自行设计和开发出一整套适合国内发展现状和符合国内生产实际的胶体金相关设备。在某些方面弥补了国外设备及配件不能完全匹配国内生产线实际需要等方面的缺陷，适宜连续大规模的进行胶体金试剂盒的生产。这些设备包括：   

    1 连续生产型点膜机（重点推荐）；

　　2 科研型一维往复式点膜仪；

    3 科研型二维循环式点膜仪；

    4 往复式喷金标仪；

    5 数控闸刀式高速切条机；

     连续式点膜机是我公司参考国外同类产品，结合 国内生产实际，组织天津大学生命与工程研究院为主的国内科研力量改良研发的新一代点膜仪。该仪器一次吸液后可以连续点膜，极大提高了点膜效率，降低试剂无效损耗；它的往复泵采用的是国外专业生产商提供的产品，性能稳定，精度可靠；它的程序操作界面，经过实验型、生产型用户反复测试，界面友好，操作简便。标准配置两个泵，可增配至四个泵。该仪器不但能够满足实验室 小试研发的工艺摸索试验的需要，更适合于中试和大批量生产的需要。

    连续式点膜仪是用于胶体金免疫层析检测试剂盒等领域的生产型设备，能连续地把reagent均一地分布在硝酸纤维素膜上，在生产效率上大大地高于实验室用设 备，机器配置两套高精度生化泵、相应点膜管线及点膜头（均美国进口），可同时点C、T线，不会划伤膜。该机器的使用只需要引入220CAV/1KVA的电源即可，整机触摸屏操作，全中文提示（根据客户需要，可显示为英文），操作简单。本机器成功地经过大规模生产型企业考验，性能非常稳定，值得信耐。

    相关参数介绍：

    设备体积：125x 43 x 37 cm          X轴移动速度：0—83mm/s       

    泵溶液量：2500ul                   喷量范围:0.5—9.99ul/cm            

    产品特点：

    1．中文操作界面，操作简单， 快键设置实用方便.

    2．本产品使用传送带做传动，可以进行连续点膜.

    3．用一次性Tip点膜，方便不同溶液的点样.

    4．泵和阀都可独立操作，可以反向操作使液体回流或倒吸，方便微量样品的点膜操作.

    5．设置了空气阱，可在一定程度上减少点膜时的气泡影响.

    6．仪器可以根据要求转入连续操作状态。

    数控闸刀式高速切条机，适合对各种材料的片材进行指定宽度的快速斩切。由高力矩常规电机驱动进行斩切。送料电机是高精度数字电机。送料辊进行了特殊设计。特种硬质合金钢制成的斩切刀片具有良好的耐磨性，上刀在斩切100万次后才需要磨刀。刀片不作任何松动就可清洁全部刀刃面。仪器标准配备吹风系统，内置有气泵，不需要外连接任何气源。仪器具有自动计数及限制数量功能，方便进行生产量的控制及统计。

    该剪切机适于胶体金试纸条的切割，切割成品宽度2mm—9 mm，切割后产品误差在±0.1mm范围内，完全能满足device装配的需要，切割速度140—220条/min，机器适应片材宽度40mm—100mm。该机器的使用只需要引入220CAV/1KVA的电源即可，触摸屏操作，全中文提示（根据客户需要，可显示为英文），操作简单。刀具采用优质合金高速钢制作，耐磨易更换，刀具配件供货方便。本机器成功地经过大规模生产型企业考验，性能非常稳定，值得信耐。  

    相关技术规格：

    设备体积：53 x 34 x 24 cm         斩切精度：+0.01mm

    宽度范围：2.0-9.0 mm              最大斩切速度：150-200次/分钟

    宽度调节：-0.5- 0.5 mm            物料残留：3cm左右

    除静电装置,离子风装置

    产品特点：

    1. 中文操作界面，操作简单，快键设置实用方便.

    2．标准配置内置气泵，减少碎条黏附切刀的机会.

    3．通过操作面板可以进行手动向前，向后送料操作.

    4．仪器具有自动计数及减数功能，方便进行生产量的控制及统计。

    为适应不同对象的使用，我们目前开发了两种机器版本：

    1．标准版：机器包含离子风装置，能有效清理试纸条上地静电，使切割能有效连续地进行，适用于中、大规模产

       业模式；

    2．简易版：机器不含离子风装置，适用于实验室、小规模产业模式。

    往复式喷金标仪是我公司参考国外同类产品，组织科研力量改良研发的喷金标仪。该型仪器采用气动喷头进行溶液喷线；往复平台由高精度数字电机驱动在X轴方向进行来回移动。高精度步进泵抽取喷涂溶液，运行平稳，重复性好。金标垫的生产可采用我公司的喷金标仪进行制备，也可以采用浸泡法，不同厂家有不同的工艺路线选择，有需要的厂家请向本公司进一步索取设备演示光盘。

    往复式喷金标仪 功能是将金标试剂均一的喷点在结合膜上。喷点形式为单条来回喷线，线条距离可设定，启始点位置可设定，每片膜喷点条数可设定，喷量范围：0.1μl/cm-9.99μl/cm，喷点长度：50mm-310mm。该设备拥有多项报警功能，能方便客户及维护人员查找故障。

    公用系统：

    1．电源：200～240VAC/50HZ、1.2KVA；

    2．气源：0.4～0.7Mpa，洁净度≤5μm。

    3．设备的使用环境温度为0～40°，相对湿度为30—80%（不凝结）；

    相关参数介绍：

    喷点间距：指定需要点的金标线条之间的距离；

    喷点长度：既每条金标线条的长度，它的设定范围为10～310毫米；

    停顿时间：即点两片之间的间隔时间；

    喷点数量：即每张聚脂膜上应该点的金标线条数量；

    起始点位置的“X”、“Y”坐标：它们的范围都是0～25毫米，通常“X“坐标的位置为0；

    清洗次数：指在清洗时针筒上下往复的次数；

    喷点片数：点了该参数设定片数的聚脂膜后，设备自动停机；

    吸液泵速：指针筒抽液时的速度；

    清洗泵速：指在清洗过程中针筒活塞的速度；

    针筒容量：设定范围是250～2500μl，当然我们根据实际情况一般只取250、500、1000、2500这几个数值；

    喷量：根据产品要求设定，其范围为0.1～9.99μl/cm；

    针筒活塞速度：喷点时针筒活塞移动的速度。

    n 胶体金免疫层析试剂全套生产耗材

    快速免疫诊断试剂盒必须能一致、快速、准确的给出结果。纸张和膜的联合应用是达到这样结果的关键因素。派坤生物提供胶体金免疫层析诊断试剂开发需要的关键性耗材包括塑料垫片、样品垫、胶体金结合垫、吸收垫、全血滤血膜及硝酸纤维素膜等。主要是针对那些需要用低价购买少量材料的刚起步的生产商，可以节省开模具和预处理等环节的费用。所有出售的材料均通过派坤生物-美国MRC的质量鉴定和经过 派坤国内技术人员的试验筛选， 并已形成了派坤原料采购和质量控制的企业标准， 因此可以节约您的材料筛选时间。这些材料包括：

    1 样品垫(Sample pad)：玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。

　　　样品垫的作用主要为：

　　-　减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布；

　　-　去除样品中杂质颗粒；

　　-　调节样品液pH值或粘度等。

    2 结合垫(Conjugate pad)：玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。

      结合垫的作用主要为：

　　-　吸附一定量的金标结合物颗粒；

　　-　吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上；

　　-　保持金标结合物颗粒的稳定性；

　　-　保证金标结合物颗粒定量完全释放等。

　  3 硝酸纤维素膜( Nitrocellulose)：推荐使用Millipore，MDI，S&S，whatman等国外公司的硝酸纤维素膜。

　　NC膜的作用：

    -　在检测线和对照线条带区域固定抗体；

　　-　样品在NC膜上流动并与试剂混合发生免疫反应；

　　-　反应在NC膜上显色，读检测结果。

　　NC膜的重要参数：孔径、对称性、层析速度、表面活性剂、蛋白结合力、强度、表面质量、厚度、批间均一性等。

图2. 胶体金免疫层析内部组件规范性名称

　　在免疫层析试剂中，检测目标分析物是否存在的物质就是固定在膜上的蛋白，因此试剂检测结果的好坏很大程度上依赖于蛋白在膜上固定效果的好坏。

　　广泛应用于固定化方法是物理方法，也有一些用化学方法进行固定。物理方法以其简单并且实用被广泛采用，这里只讨论物理固定化方法。蛋白在膜上固定化的机理还不确定，但大家都认可疏水作用力、H键和静电作用力等对固定化有贡献。试验也表明，任何影响以上三种作用力的因素，都会影响蛋白的固定化。因此在优化固定化条件时，必须要同时考虑优化条件对这三种作用力的影响。除了蛋白试剂和膜本身之外，溶解试剂的缓冲液、环境温度和湿度及用于蛋白固定在膜上的仪器设备都是蛋白固定化的影响因素。其中缓冲液的作用尤为突出，也是只要优化对象，缓冲液中的离子强度、PH值和其他试剂（比如稳定剂BSA）都会对蛋白的固定起明显的作用。研究人员在固定过程中对各种因素都应该了解，这样在优化过程中能考虑各种因素进行整体优化，而不能只是在某一两个方面集中优化而忽略其他因素的作用。

图3. 抗体在硝酸纤维素膜上的固定所经常遇到的问题

　　由于NC膜本身是疏水的，因此在蛋白结合后要对膜进行封闭处理，使膜表面变得更具亲水性。很多产品都是用NC膜浸泡在封闭溶液中进行封闭；也有一部分将封闭溶液喷洒在样品垫或金标垫上，当加样时封闭会随溶液向上层析而自动进行。

    4 吸收垫(Absorbent Pad)：提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸收纸；

      吸收纸的作用主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。

    5 片材：大量供应可完全替代进口产品的国产优质不干胶塑料衬底；片材的质量很大程度上影响了产品的货架期，

     本公司推出的 标准片材已经被国内众多胶体金厂家采用。特点：有现成贴硝纤膜，吸水纸及样品垫刻度线，大大

     为生产组装提供了方便，且规格可自行定制。

    6 塑料外壳：可帮您设计和定制组装检测卡所需的塑料外盒；也可以采用本公司推出的通用型设计的塑料外壳，该

      快速测试塑料卡外部形状美观。内部结构针对不同纸条及测试设计。加样窗口平滑，样本流动顺畅。对于小量制

      备样品的客户此项服务可免除您开模具的费用；

图4. 胶体金免疫层析试剂盒塑料外壳结构设计

    7 MAX线标签：各种式样。特点：粘附性好，是单条样金标产品不可缺少的辅材。  

      说明：通常使用尺寸为长*宽（mm)：300*44，具体尺寸可以根据客户要求定制；

    8 色皮标签：色彩鲜艳，粘附性好，是多项目金标产品不可缺少的辅材。

      说明：通常使用尺寸为长*宽（mm)：300*34，具体尺寸可以根据客户要求定制；

    9 透明胶带：颜色透明，供覆盖硝酸纤维膜，结合垫或者部分样品垫使用。

      说明：胶带宽度可以根据客户要求定制；

    10 半透明胶带：特点：供粘贴硝酸纤维膜，结合垫和全血滤膜使用，亚白，医用级胶水，低冷流，免疫反应无干

       扰，老化不变色，不裂解红细胞膜(可配合使用于全血产品)；

    11 干燥剂：推荐用派坤标准配置一次性吸管；

    12 一次性吸管： 推荐用派坤标准配置一次性吸管；

    13 缓冲液瓶：提供各种规格的缓冲液瓶，派坤标准配置采用全封闭设计，可有效的防止漏液；

    14 试纸筒：试纸筒以聚丙烯为主要原料，由盖与筒组成，盖与筒均为白色。可根据客户要求放置干燥剂。试纸筒

       密封性能好。盖易于压紧和打开。

    15 铝箔袋：提供检测试纸条和检测卡外包装袋，白包装袋或定制各种式样的铝箔袋。 派坤可提供从设计，制模到

       大量印刷的一条龙服务。

    请向本公司查询以上各种材料和设备的价格，批量购买可享受折扣。

    n 金标网店

        派坤公司为进一步的方便科研以及课题小组的耗材选择，特准备了几种标准规格的试剂耗材打包出售。详情可

    在派坤学苑讨论区(www.3i.com.cn/bbs)开设的金标网店上获得进一步咨询。按不同要求的情况包装情况如下，请

    选择最适合您需要的采购方案：

     方案一:

         做实验外,还需要出1000--2000产品的客户

         打包情况:胶体金 100ml*5元/ml =500元

         硝酸纤维素膜 Sartorius CN 140 15元/根*20=300元 + Millipore135 30元/根*4根=120元

         H-8吸水纸 0.3元*40根=12元

         F-02C 胶带 20元*1卷=20元

         J-B6/J-B8 胶板 1.5元*50板=75元

         试纸筒 1.8元*100=180元

         GF-06 玻璃纤维膜 5元*50张= 250元

         P-03 MAX线标贴 1.0元*30=30元

         色皮标签 0.8元*30=24元

         干燥剂 8元/小袋*5=40元

         胶体金稀释液配方干粉 1元/1ml量*500=500元

         合人民币:2051元 打包优惠价:1950元整

         注:如有塑料卡和铝铂袋包装方面需要,请另外添加

     方案二:

         只做实验,不需要出多少产品的客户

         打包情况:胶体金 50ml*5元/ml =250元

         硝酸纤维素膜 Sartorius CN 140 15元/根*10=150元 + Millipore135 30元/根*4根=120元

         H-8吸水纸 0.3元*20根=6元

         F-02C 胶带 20元*1卷=20元

         J-B6/J-B8 胶板 1.5元*20板=30元
 
         试纸筒 1.8元*5=9元

         GF-06 玻璃纤维膜 5元*20张= 100元

         P-03 MAX线标贴 1.0元*3=3元

         色皮标签 0.8元*3=2.4元

         干燥剂 8元/小袋*1=8元

         金子稀释液配方干粉 1元/1ml量*100=100元

         合人民币:798.4元 打包优惠价:750元整

         注:如有塑料卡和铝铂袋包装方面需要,请另外添加。
                             　

七、 胶体金法体外诊断试剂生产许可证代理申报

    派坤生物公司提供体外诊断试剂生产许可证的申办一条龙服务，内容包括：厂址选择、硬件改造咨询；申报资料报送、取证等。

    此项服务内容包括如下咨询内容及其作业文档成果：

    1.准备开办体外诊断试剂生产企业所需的各种管理制度和记录。
    2.对企业的硬件现状进行考察并提出体外诊断试剂生产企业验收准备的硬件和软件整改的总体意见。
    3.提供体外诊断试剂生产企业中各级、各部门岗位人员的培训。
    4.提供体外诊断试剂质量体系认证咨询。
    5.提供拟生产诊断试剂产品项目可研报告和市场调研分析报告。

    生产 胶体金法体外诊断试剂（第二类、第三类医疗器械）的企业开办基本按下列顺序提交申请资料：

    1、医疗器械生产企业许可证（开办）申请表

    填报要求：

    （1）所有项目必须填写齐全，空缺栏用“/”表示不适用。

    （2）生产厂名必须与工商行政部门核准的名称一致。

    （3）地址应与产权证或租赁合同相一致。

    2、企业法定代表人、负责人的基本情况和资质证明

    （1）身份证明（身份证复印件）

    （2）资质证明（学历证明、职称证明）

    （3）任命文件

    （4）工作简历（从高等院校毕业或参加工作开始）

    3、工商行政管理部门出具的企业名称核准通知书或营业执照原件和复印件

    4、生产场地证明文件

    （1）产权证明或租赁合同和产权证明复印件

    （2）厂区总平面图

    （3）主要生产车间布置图（洁净车间应标明功能间及人流物流）

    5、其他从业人员情况证明文件

    （1）企业生产、技术、质量部门负责人简历、学历和职称证明（复印件）

    （2）相关专业技术人员、技术工人登记表（应标明部门及岗位）

    （3）高中初级技术人员比例情况表

    （4）内审员证书复印件

    6、拟生产产品范围、品种和相关产品简介

    产品简介至少包括对产品的结构组成、原理、与其用途的说明及产品标准。

    7、主要生产设备及检验仪器清单

    清单应以表格形式提供，栏目至少应有：设备名称、规格、数量、产地、设备编号、用途等。

    8、生产质量管理规范文件目录

    包括采购、验收、生产过程、产品检验、入库、出库、质量跟踪、用户反馈、不良事件检测和质量事故报告制度等 文件、企业组织机构图及相关质量职责。

    9、拟生产产品的工艺流程图

    应标明主要控制项目和控制点，关键工序和特殊工序。

    10、有无菌要求的车间，须提供洁净车间合格检测报告

    环境检测应符合YY0033－2000标准要求。检测项目至少包括：温度、湿度、风速、静压差、尘埃数、沉降菌数。

    11、申请材料真实性的自我保证说明

八、 胶体金法体外诊断试剂经营许可证代理申报 

    派坤生物公司根据关于印发体外诊断试剂经营企业（批发）验收标准和开办申请程序的通知国食药监市[2007]299号。适时推出体外诊断试剂经营许可证咨询服务。

    该项目具体服务内容包括：
    1.准备开办体外诊断试剂经营企业所需的各种管理制度和记录。
    2.对企业的硬件现状进行考察并提出体外诊断试剂经营企业验收准备的硬件和软件整改的总体意见。
    3.提供体外诊断试剂经营企业中各级人员的培训。
    4.提供体外诊断试剂经营企业质量体系认证（GSP）。

    经营 胶体金法体外诊断试剂（第二类、第三类医疗器械）的企业开办基本按下列顺序提交申请资料：

    1.《医疗器械经营企业开办申请表》

    2.工商行政管理部门核发的《企业名称预先核准通知书》（复印件）

    3.企业法定代表人的身份证（复印件）

    4.经营（仓储）场地的有关证明（产权证、租赁协议等）（复印件）

    5.《医疗器械经营企业许可证（备案）申请表》

    6.营业执照（加盖企业公章的复印件）

    7.《医疗器械生产（经营）企业开办许可通知书》（复印件）

    8.人员资质证明文件和培训证明（复印件）

    9.有关产品进货验收、仓储保管、售后（跟踪）服务、投诉处理和记录等经营质量管理制度的文件（目录）

九、 胶体金法体外诊断试剂GMP认证咨询 

    GMP是世界卫生组织（WHO），对所有制要企业质量管理体系的具体要求。国际卫生组织规定，从1992年起出口药品必须按照GMP规定进行生产，药品出口必须初具GMP证明文件。GMP在世界范围内已经被多数国家的政府、制药企业和医药专家一致公认为制药企业和医院制剂室进行质量管理的优良的、必备的制度。GMP在某种意义上是产品销售到国际市场的准入证之一。在我国现行的体外诊断试剂生产和质量管理上，按药品进行管理的 胶体金法体外诊断试剂须进行GMP认证。

    生产企业须提交的GMP认证申报资料一般包括：

    1.关于申请“GMP认证” 预验收的请示报告 

    2.《GMP认证申请书》及《企业法人营业执照》（复印件）

    3、药品生产管理和质量管理自查情况(包括企业概况及历史沿革情况、生产和质量管理情况、前次认证缺陷项目的改正情况)

    4、药品生产企业组织机构图(注明各部门名称、相互关系、部门负责人)

    5、药品生产企业负责人、部门负责人简历；依法经过资格认定的药学及相关专业技术人员、工程技术人员、技术工人登记表，并标明所在部门及岗位；高、中、初级技术人员占全体员工的比例情况表

    6、药品生产企业(车间)的负责人、检验人员文化程度登记表；高、中、初级技术人员的比例情况表

    7、药品生产企业生产范围全部剂型和品种表；申请认证范围剂型和品种表(注明常年生产品种)，包括依据标准、药品批准文号；新药证书及生产批件等有关资料的复印件

    8、药品生产企业周围环境图、总平面布置图、仓储平面布置图、质量检验场所平面布置图

    9、药品生产车间概况及工艺布局平面图(包括更衣室、 盥洗间、人流和物流通道、气闸等，并标明人、物流向和空气洁净度等级)；空气净化系统的送风、回风、排风平面布置图；工艺设备平面布置图

    10、申请认证剂型或品种工艺流程图，并注明主要过程控制点及控制项目

    11、药品生产(车间)的关键工序、主要设备、制水系统及空气净化系统的验证情况；检验仪器、仪表、衡器校验情况

    12、药品生产企业(车间)生产管理、质量管理文件目录

十、 胶体金法体外诊断试剂基金申请咨询 

    科技型中小企业技术创新基金
    （申请胶体金法体外诊断试剂项目概要） 

    模板/目录
    一、总论 
    1、简述申请基金项目的主要内容 
    2、社会经济意义、目前的进展情况、申请技术创新基金的必要性。 
    3、简述本企业实施项目的优势和风险。 
    4、项目计划目标。（此目标不是指企业指标，也不是指本项目达到的生产能力，而是指本基金项目在执行期内可实际累计实现的指标）（要掌握好项目计划目标与项目实施周期的关系；项目技术指标、经济指标的合理性；项目技术、经济指标的可实现性）（阶段目标应应包括进度指标、技术开发指标、资金落实额、生产建设情况、实现销售收入）每一阶段目标应进行比较详细的、可进行考核的定性定量描述；阶段目标的完成时指标应与“项目计划目标”中的“经济目标”、“技术、质量指标”相一致。
    5、主要技术经济指标对比 
    二、申报企业情况 
    1、申报企业基本情况 
    2、企业人员及开发能力论述 
    3、企业财务经济状况（要体现出企业财务管理规范、财务状况清晰，财务质量好）
    4、企业管理情况 
    5、企业发展思路 
    三、项目技术可行性分析（创新基金希望可行性报告能体现：如是比较成熟的项目、重点项目或成长型企业，应能确保项目实施的成功；有一定风险的项目，应是技术含量高、水平高、创新程度高的项目）
    1、项目的技术创新性论述（重点说明项目技术的创新性，此部分为可行性报告的重点部分）（此段为关键部分，应分点说明项目技术创新点，重点支持原创性技术。要注意技术集成、技术改进在创新性上的不同难度、复杂程度的区别）（发明专利比较受关注）
    2、技术成熟性和项目产品可靠性论述 
    四、项目产品市场调查和需求预测 （产品的市场容量的大小、走势；产品进入市场的难度；项目产品的市场竟争优势；项目产品的市场占有率。要注意用权威性的数据、行业背景状况、国内外同类技术、产品、厂家情况、企业及项目产品自身的能力、条件、特点、优势进行分析、对比）
    1、项目产品的主要用途 
    2、本项目产品国内主要研制单位 
    3、分析本项目产品的国内外市场竟争能力 
    五、项目实施方案 
    1、项目开发计划 
    2、技术方案论述 
    3、生产方案论述 
    4、营销方案 
    5、其它问题的解决方案 
    六、新增投资估算、资金筹措 （投资预算的合理性，新增投资来源的可行性、可信性；创新基金的需求程度；创新基金的使用交通及投资回报）
    1．投资预算 
    2、资金筹措 
    3、资金使用计划 
    七、经济、社会效益分析 
    1、产品成本分析 
    2、产品单位售价与盈利预测 
    3、经济效益分析 
    4、项目投资评价 
    5、社会效益分析 
    八、项目可行性研究报告编制说明 
    九、项目可行性研究报告的专家论证意见 

    附件：

    1、营业执照复印件（必备）

    2、200*年**月财务报表（必备）

    3、200*、200*年财务审计报告（审计报告每页需有会计师事务所盖章）（必备）

    4、项目开发技术任务书

    5、技术检测报告

    6、查新报告

    7、用户报告（重要）

    8、用户合同

    9、宣传材料

十一、 胶体金法体外诊断试剂高新技术企业申报咨询 

    以上海市申报高新技术企业为例，申办对象应具备条件（高新技术范围将根据国内外高新技术的发展适时进行补充和修订）：

    1.上海市高新技术产业开发区外的企业。
    2.从事规定范围内一种或多种高新技术及其产品的研究、开发、生产和技术服务以及支持高新技术产业发展的其他相关企业（高新技术产品目录另行颁布）。单纯的商业贸易除外。
    3.具有企业法人资格、并按规定进行税务登记。
    4.具有大专以上学历的科技人员应占企业职工总数的30％以上，其中从事高新技术产品研究开发的科技人员应占企业职工总数的10％以上。
　  从事高新技术产品生产或服务为主的劳动密集性高新技术企业，具有大专以上学历的科技人员应占企业职工总数的20%以上。
    5.企业的技术和产品在国内处于领先地位或达到国际上近十年内先进技术水平。
    6.有良好的市场前景或通过引进、消化、吸收、创新的出口创汇的先进技术产品。
    7.企业每年用于高新技术及其产品研究开发的经费应占本企业当年总销售额的5％以上。
    8.高新技术企业的技术性收入与高新技术产品销售收入的总合应占本企业当年总收入的60％以上。
    9.企业的主要负责人应是熟悉本企业产品研究、开发、生产和经营，并重视技术创新的本企业专职人员。
    10.具有完整的企业章程和生产、技术、财务等管理制度。
    11.具有相应的研制、生产条件以及产品质量保证措施。

    申办对象应做事项和应准备的材料：

    1、 填写《上海市高新技术企业认定（复审）申请表》
    2、 填写《200*年度上海市高新技术企业认定（复审）单位情况简表》
    3、 营业执照（副本）复印件；
    4、 企业章程、技术、生产、财务管理制度；
    5、 上年度经审计的财务报表复印件（资产负债表、利润表或损益表）；
    6、 获奖证书复印件（包括投产5年内的高新技术产品的各种奖状及企业管理的各类获奖证书等）；
    7、 通过各类质量体系认证的，需提交复印件。
    8、 获得"先进技术企业"称号的单位，附证书复印件；
    9、 申请认定上海市高新技术企业书面报告。报告内容如下：
　　1) 企业基本情况（人员结构、企业规模、主要产品等）；
　　2) 高新技术产品的介绍（指产品的技术水平及与国内外同类产品的比较、产品的销售、市场占有和出口创汇等情况）；
　　3) 生产装备及管理现状（包括有哪些先进的仪器设备，是否已建立CAD，CAM，CAT等体系，质保体系及企管体系等）；
　　4) 科研开发经费的投入（包括在研项目及在开发项目的技术水平、市场前景及产业化前景的预测）；
　　5) 企业的发展情况与打算（包括近期发展情况和今后发展方向、打算，以及外向型发展的打算等）。

十二、 胶体金法体外诊断试剂厂房、车间设计 

    派坤生物公司提供给客户的厂房、车间设计图纸和方案一般从以下几方面进行阐述（以胶体金类体外诊断试剂车间设计为例）：

    洁净区要求请参见国家相应法规文件：

    《体外诊断试剂生产实施细则》、《体外诊断试剂生产用净化车间环境与控制要求》

    - 诊断试剂生产企业周围环境图

    - 总平面布置图

    - 仓储平面布置图

    - 质量检验场所平面布置图

    - 诊断试剂生产车间设计及工艺布局平面图

    （包括更衣室、 盥洗间、人流和物流通道、气闸等，并标明人、物流向和空气洁净度等级）；

    - 空气净化系统的送风、回风、排风平面布置图；

    - 工艺设备平面布置图

    同时要考虑：

    - 生产（车间）的关键工序、主要设备、制水系统及空气净化系统的配置使用情况；

    - 检验仪器、仪表、衡器配置使用情况等等。

    提供给客户的作业文档一般包括：

    《关于金标车间、点膜车间、配液车间、烘房、成品库等车间分工和配合的规划》、《关于金标车间、点膜车间、配液车间、烘房、成品库等工作单元（车间）的环境要求》、《生产区域人流设计要求》、《关于生产区域物料流转设计、《具体车间的设计要求及其依据》、《车间设计图纸建议》、《国内胶体金生产企业亟需补充建立半成品质量管理的意义和实施方案》等。

    胶体金法体外诊断试剂厂房、车间设计方面的垂询请直接致电派坤热线：021-51098851。  

图5. 胶体金免疫层析试剂盒生产车间直观图

    附： 《体外诊断试剂生产用净化车间环境与控制要求》

    第一条 对生产环境有净化要求的产品除应当满足《体外诊断试剂产品生产实施细则》的通用要求外，其生产环境还应满足本附录的要求。不同洁净级别生产区域的控制标准参见下表：

    表：不同洁净级别生产区域的控制标准

    第二条 企业应明确工艺所需的空气净化级别，进入洁净室(区)的空气必须净化。采用孔径为0.22μ或以下的滤膜过滤除菌，进行封闭式连续过滤分灌装的试剂可适当降低环境空气净化级别。以下为推荐采用的环境净化级别：

    阴性、阳性血清或血液制品的处理操作应在至少10，000级环境下进行。并符合防护规定。

    酶联免疫吸附试验试剂、免疫荧光试剂、免疫发光试剂、聚合酶链反应（PCR）试剂、金标试剂、干化学法试剂、培养基、校准品与质控品等产品的配液、包被、分装、点膜、干燥、切割、装配、以及内包装等工艺环节，至少应在100，000级净化环境中进行操作。

    酶类、抗原、抗体和其他活性类组分的配制及分装，其生产操作至少应在300，000级净化环境中进行。

    普通化学类诊断试剂的生产应在清洁环境中进行。

    第三条 厂房应有防止昆虫和其他动物进入的设施。

    第四条 企业应提供洁净区内生产工艺流程图和空气调节、配电照明等平/立面图。新建、改建、扩建的洁净区厂房应提供有资质的设计单位设计的图纸。

    第五条 在设计和建设厂房时，应考虑使用时便于进行清洁工作。洁净室（区）的内表面应平整光滑、无裂缝、接口严密、无颗粒物脱落，并能耐受清洗和消毒，墙壁与地面的交界处宜成弧形或采取其他措施，以减少灰尘积聚和便于清洁。

    第六条 洁净区应配置空气消毒装置，有平面布置图、编号和使用记录。

    第七条 洁净室(区)内各种管道、灯具、风口以及其他公用设施，在设计和安装时应考虑使用中避免出现不易清洁的部位。

    第八条 洁净室(区)应根据生产要求提供足够的照明。主要工作室的照度宜为300勒克斯；对照度有特殊要求的生产部位可设置局部照明。厂房应有应急照明设施。

    第九条 洁净室(区)的窗户、天棚及进入室内的管道、风口、灯具与墙壁或天棚的连接部位均应密封。

    第十条 更衣室、浴室及厕所的设置不应对洁净室(区)产生不良影响。

    第十一条 洁净车间安全门向安全疏散方向开启，平时密封良好，紧急情况发生时应能保证畅通。

    第十二条 洁净室(区)内应使用无脱落物、易清洗、易消毒的卫生工具，应指定地点存放，存放地不应对产品造成污染。

    第十三条 操作台（板）应光滑、平整、无缝隙、不脱落异物，便于清洗、消毒，不可用木质或油漆台面。

    第十四条 洁净室(区)的空气如可循环使用应采取有效措施避免污染和交叉污染。

    第十五条 空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5帕，洁净室(区)与室外大气的静压差应大于10帕，应配备监测静压差的设备，并定期监控。

    第十六条 洁净室(区)的温度和相对湿度应与试剂产品生产工艺要求相适应。

    第十七条 洁净室(区)内安装的水池、地漏不得对物料产生污染。

    第十八条 不同空气洁净度级别的洁净室(区)之间的人员及物料出入，应有防止交叉污染的措施。应建立、执行物料进出洁净区的清洁程序，有脱外包装室、净化室和双层传递窗（或气闸室）。

    第十九条 洁净室(区)和非洁净室(区)之间应有缓冲设施，洁净室(区)人流、物流走向应合理。

    第二十条 根据生产工艺要求，洁净室(区)内设置的称量室和备料室，空气洁净度级别应与生产要求一致，并有捕尘和防止交叉污染的设施。

    第二十一条 在净化车间内工作的人员应穿着符合要求的工作服。工作服的选材、式样及穿戴方式应与生产操作和空气洁净度级别要求相适应，并不得混用。洁净工作服的质地应光滑、不产生静电、不脱落纤维和颗粒性物质。无菌工作服必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。

    第二十二条 不同空气洁净度级别使用的工作服应分别清洗、整理，必要时消毒或灭菌。工作服洗涤、灭菌时不应带入附加的颗粒物质。工作服应制定清洗周期。100，00级以上区域的洁净工作服应在洁净区内洗涤、干燥、整理，按要求灭菌。

    第二十三条 洁净室(区)仅限于该区域生产操作人员和经批准的人员进入。

    第二十四条 进入洁净室(区)的人员不得化妆和佩带饰物，不得裸手直接接触物料，净室(区)应定期消毒。使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。

    第二十五条 在净化车间内工作的生产人员应有健康档案。直接接触产品的生产人员每年至少体检一次。

    第二十六条 应建立、执行人员进出洁净区的清洁程序和管理制度，人员清洁程序合理。

    第二十七条 洁净区的净化系统、消毒及照明等装置应按规定进行清洁、维护和保养并进行记录。

    第二十八条 在净化车间内工作的生产人员应接受净化车间卫生管理制度、个人清洁卫生制度、净化车间使用管理制度等内容的培训，合格后持证上岗。

    第二十九条 企业应在验证的基础上明确规定洁净区环境监测的项目和频次，在静态检测合格前提下，企业应按规定进行洁净室(区)内空气温湿度、压差、风速、沉降菌和尘粒数的定期监测，并保存监测记录。

    第三十条 生产激素类试剂组分的洁净室（区）应采用独立的专用的空气净化系统，且净化空气不得循环使用。

    第三十一条 强毒微生物操作区、芽胞菌制品操作区应与相邻区域保持相对负压，配备独立的空气净化系统，排出的空气不得循环使用。

十三、 胶体金法体外诊断试剂质量体系文件及各部门岗位SOP 

    派坤生物公司根据2007年6月1日实施的新《体外诊断试剂注册管理办法》和2007年4月实施的《体外诊断试剂质量管理体系考核实施规定》，适时的推出了专门针对按照《医疗器械注册管理办法》归为二类、三类医疗器械（诊断试剂）的生产企业而推出的体外诊断试剂质量管理体系考核服务工作。具体服务内容包括： 新建或改建车间工艺图纸合理性审核、新建车间选址合理性评估、体外诊断试剂质量管理体系建立（文件体系建立、相关人员培训）、质量管理体系运行效果评估等，保证一次性通过国家药品监督管理局或省市药品监督管理局的体系考核。为各级生产企业节约费用、节省时间、节省人员，保证以最快的速度获得产品注册。

    1.对企业的质量管理体系现状进行考察并提出体外诊断试剂体系考核准备的总体意见。

    2.对体外诊断试剂体系考核现场总平面布局图及车间工艺平面布局图的合理性评估、咨询。

    3.提供厂房设施及设备选型的合理性咨询。

    4.提供体外诊断试剂质量管理体系考核所需文件系统分类和目录清单。

    5.负责提供体外诊断试剂质量管理体系考核各类文件的编写指导意见。

    6.提供体外诊断试剂质量管理体系考核人员的培训，包括体外诊断试剂质量管理体系考核准备方面人员的培训。

    7.提供体外诊断试剂质量管理体系考核的准备工作程序的总体安排意见。

    8.提供相关验证文件指导并指导实施验证工作。

    9.提供专家顾问的模拟检查。

    严格按照 胶体金法体外诊断试剂质量体系文件系统进行规范生产，对全企业产品生产过程中质量把关，可保证生产出合格的优质产品。它包括质量管理、质量监督和质量检定。质量部负责人主要工作职责如下：

    质量管理：                                             

    1．负责组织各部门每季度召开质量分析会，分析总结质量状况。

    2．质量检验、QA和药品注册，并保证其工作的正常进行。

    3．保证质量体系认证工作的进行。

    4．对投诉报告的处理进行论证和审查。

    质量监督：

    1．对新工艺、新技术、新材料、新处方的进行审查，为鉴定作出有关的实验或检验报告，对能否投入生产提出意见。

    2．对不合格的现象和产品进行监督。

    质量检定：

    1．对客户的发样产品进行QC操作。

    2．安排对其它公司产品进行比较试验和对公司内部产品定期进行检测。

图6. 胶体金免疫层析试剂连续生产中的QC检验
　

    国家体外诊断试剂生产实施细则规定，诊断试剂生产企业应至少建立、实施、保持以下程序文件：

    1 文件控制程序；

    2 记录控制程序；

    3 管理职责；

    4 设计和验证控制程序；

    5 采购控制程序；

    6 生产过程控制程序；

    7 检验控制程序；

    8 产品标识和可追溯性控制程序；

    9 生产作业环境和产品清洁控制程序

    10 数据统计与分析控制程序；

    11 内部审核控制程序；

    12 管理评审控制程序；

    13 不合格品控制程序；

    14 纠正和预防措施控制程序；

    15 用户反馈与售后服务控制程序；

    16 质量事故与不良事件报告控制程序。

    具体到胶体金法体外诊断试剂生产企业，按照中国实际质量控制水平，其生产部门文件系统一般应包括以下内容：

    清场制度；
    工艺卫生制度；
    任务单管理制度；
    生产批号管理办法；
    每日温度登记；
    工作服管理；
    批生产记录管理制度；
    洁净区管理制度；
    洁净区清洁卫生管理制度；
    生产区人员进出程序；
    生产区物料进出程序；
    设备管理制度；
    设备编号规定；
    设备验证制度；
    工程维修安全操作规则；
    固定资产管理制度；
    生产部物料管理制度；
    设备事故管理制度；
    设备使用维护制度；
    设备检修制度；
    设备事故管理制度；
    设备管理图；
    设备管理组织图；
    洁净区净化设备检测与维护制度；
    配液车间工作总则；
    点膜车间工作总则；
    金标溶液点膜步骤；
    粘膜车间工作总则；
    NC膜粘贴步骤；
    切割车间工作总则；
    切割操作步骤；
    装配车间工作总则；
    试纸条装配步骤；
    试剂板装配步骤；
    试剂棒装配步骤；
    试剂筒装配步骤；
    封口工作步骤；
    装盒工作步骤；
    装箱工作步骤；
    打码车间工作总则；
    打码工作步骤；
    包装管理规范；
    产品包装资料；
    除湿调温系统操作规程；
    打码机操作规程；
    磁力加热搅拌器操作规程；
    高速冷冻离心机操作规程；
    自动双重纯水蒸馏器操作规程；
    超声波清洗器操作规程；
    点膜机操作步骤；
    恒温培养箱使用规程；
    切割机操作规程；
    空气压缩机操作规程；
    塑料热合机操作步骤；
    封口机操作规程；
    真空泵操作规程；
    冰箱使用规程；
    冷柜使用规程；
    紫外光光度计操作规程；
    电子天平操作规程；
    分析天平操作规程；
    PH计操作规程；
    移液枪操作规程；
    吸量管使用规程；
    仓库管理细则；
    仓库备料实施细则；
    仓库物料储存条件及管理制度；
    仓库清洁卫生制度；
    质量责任规定；
    管理评审程序；
    质量计划编制程序；
    文件和资料的控制程序；
    产品标识和可追溯性控制程序；
    检验和试验控制程序；
    检验、测量和试验设备的控制程序；
    检验和试验状态控制程序；
    不合格品的控制程序；
    纠正和预防措施控制程序；
    质量记录的控制程序；
    内部质量体系审核程序；
    标签管理制度等
          

十四、 胶体金法体外诊断试剂立项建厂咨询 

    根据国际诊断试剂生产基地转移的趋势，派坤生物公司提供专业的专门针对国外体外诊断试剂（IVD Reanents）厂商的投资中国的可行性研究、策划、实施、协助落实等一条龙服务。包括投资的市场调研、机会分析、法规分析、可行性分析、确定投资方案、协助实施投资方案、代理前期产品等服务。

    派坤生物公司提供给国内外产业投资咨询客户的立项建厂可行性报告一般从以下几方面撰写：

    一、场地的可行性分析和规划

　　    场地选择和车间设计：详见第十二节 胶体金法体外诊断厂房、车间设计及各部门岗位SOP

        企业土建面积、总平面布置图、生产车间工艺流程图和工艺布局平面图及设备位置，并表明洁净级别。

    二、企业概况

        1．基本情况

        2．项目背景

        3．主要研发的项目

    三、项目投资与资金预算

        1．厂房建设和配套设施：详见第十二节 胶体金法体外诊断厂房、车间设计及各部门岗位SOP              

        2．生产设备：详见第二节 胶体金免疫层析试剂生产设备、耗材                            

        3．技术可靠性及项目状况（小试，中试还是临床考核阶段）                        

        4．批准文号申报：详见第一节 胶体金法体外诊断产品批准文号代理申报                

        5．开办费                           

        6．流动资金                          

        7．土地使用权等    

    四、项目选择及市场分析

        1．现有同类品种的比较 （其他厂家产品情况）

        1）国内现有主要检测（检验）方法的比较

        2）同国际上主要同类产品的比较（是否有知识产权问题）

        2．国内外市场分析

        1）产品定位

        2）市场需求

   五、生产规模、生产及质量管理体系

        1.生产规模及产能设计

        2.质量标准和质量体系文件：详见第三节 胶体金法体外诊断试剂质量体系文件系统的建立

        3.生产工艺的选择和优化

        1）生产工艺

        2）工艺说明

        3）工艺保证和工艺的先进性             

        4）物料供应

    六、燃料、动力、交通运输等条件说明

    七、对环境的影响

    八、管理机构与人员配置

    九、配备的主要生产设备目录

    十、配备的主要检测仪器目录

    十一、项目实施计划  

           附：中国胶体金免疫层析技术行业介绍

    医学诊断试剂可用于血库、医院及检验中心、家庭、诊所等部门。由于使用目的不同，因而诊断试剂的产品形式也不相同。目前检验医学趋于两极化发展，一级是高度集成、自动化的仪器诊断；另一级是简单、快速、便于基层普及的POCT快速诊断。前者需要价格昂贵的全自动仪器及与仪器严格配套的各种试剂盒，目前只能在医疗及检测中心应用，虽也能较快速给出结果，但仍需一定时间，不适合远离医疗及检测中心的地区，更不能用于“患者床边检验”及流动体检或广泛的普查之用。

    随着即时临床诊断（POCT）及即时临床决策和疾病普查、家庭疾病自检(Homelab)的需要，以硝酸纤维素膜为载体的快速诊断方法迅速和广泛的发展起来。其中九十年代兴起的免疫层析技术（GCIA）发展最为迅速，应用也最为广泛。一般家庭使用的验孕、排卵、乙肝、艾滋病等诊断试剂均属此类试剂。免疫层析技术由于具有快速、简便、稳定性好、可单人份检测、患者可自测、方法可家庭化、适应范围广、产品可系统化、投资少、见效快等特点，被誉为体外诊断试剂领域的新革命。

    胶体金免疫层析技术与以往常规诊断方法相比具有以下突出优点：

    ①快速：全部检测过程仅需1-3分钟。
    ②简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，可随时随地进行。
    ③可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，患者可立刻拿到结果，不必等待。
    ④稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。
    ⑤检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液，因而适合各种人群的检查。
    ⑥可向基层医疗单位推广：由于具有以上几个特点，使得本方法既可在大型医院使用，又可向基层医疗单位如：乡镇卫生院、连队卫生所、医师诊所、甚至家庭推广使用。
    ⑦患者可自检，方法家庭化：如果给试剂盒里配置适当的用品，患者可以在家里自检。
    ⑧系统化：该方法易于形成系列化产品，如肝炎系列、性病系列、胃病系列、肿瘤系列等。

    目前,国际国内大财国都将精力和财力集中在生物技术药品和保健品上，使得这两个领域的竞争与投资风险明显提高，许多实力相对较弱的投资者都先后在这方面吃了大亏。但在生物技术的诊断方法和诊断试剂方面，却鲜有大公司大企业的介入。从目前国际国内医学发展趋势看，医疗卫生事业的更高境界是对疾病的预防，更多的人、更多的注意力、更多的新闻将会被吸引到有关疾病的预防领域。非典之后,政府和卫生机构将更多的注意力盯准了诊断工作,因为做好疾病预防的关键是早期病原微生物的检查和脏器功能的检查，所以对于病原的微生物临床诊断和器材功能的检查已成为上至政府,下至百姓的普遍关注的中心和热点。2006年下半年，国家将针对诊断试剂的行业特点，推出新的注册管理办法，将以往主要按照药品进行归口管理的诊断试剂重新按照国际惯例归入医疗器械进行管理，并单独按照“试剂准字”进行申报，以往管理过严的局面一下子被打破，这必将成体外诊断试剂行业的一剂强心剂，相信2006年以后将有大量投资进入该生物产业领域。

    体外诊断试剂行业是个充满活力，很有前景的领域，也是个很特殊的行业。自80年代中期以来，这个行业在我国开始从民间自发形成和发展，迄今为止，国家几乎没有作过太多投资和规划，行业内的企业大多是合资、民营、个体类型。因此形成了充满活力和竞争的行业气氛。但同时也带有了规模较小，区域特征强，经营有待规范的特点。对新兴的免疫层析诊断试剂来说，该特点更为明显。主要表现在：

    n 生产规模有待提高
    近几年，通过引进国外的先进技术，我国科研人员也开发和研制一些免疫层析诊断试剂，在一定程度上缩短了我国与先进国家的距离。特别是国外先进生产质量管理经验的引进，对提高我国免疫层析诊断试剂生产企业的素质，促进我国免疫层析诊断试剂的产业化发展必将起到积极的作用。但目前，我国免疫层析诊断试剂的生产仍然是以外资企业为主，国内相关企业主要集中几个传统产品上，并且没有实现大规模化生产，在技术上、市场占有率上还与外资企业有一定的差距。即使是常见的一些免疫层析诊断试剂目前在国内也只有一些外资企业或中外合资企业生产。其它产品均系从国外进口或进口分装。

  n 产品品种有待丰富

    目前，国内除了hCG、HBsAg、梅毒、艾滋病、衣原体等少数几个产品外，其它大部分产品还没有做得系列化、系统化，还没有将技术、产品、服务结合在一起给客户提供合适的问题解决方案。另外，许多国外新型的检测试剂如癌症类、心脑血管类，病毒类、过敏原类等免疫层析诊断试剂在国内由于技术原因还没有形成生产能力。

    n 国家未能实现规范化管理
    体外诊断试剂行业管理的不规范不仅表现在企业内部管理未做到制度化、信息化，也表现在国家相关部门对免疫层析诊断试剂的管理至今仍然没有出台一个与FDA（510K）文件类似的合理有效的指导性管理章程。

    n 未能持续稳定的发展 
    追求持续稳定发展不仅是企业发展的目标，同时也是市场和客户对企业提出的期望。由于免疫层析诊断试剂是一个新兴的行业，大多数企业目前仍然处于起步阶段，因此，尚远未达到持续稳定发展。免疫层析诊断试剂行业在中国还很弱，但是它有着很大的发展空间，而这种发展要得到全面实现，还有很长的路要走，要做长期不懈的努力。 爱滋病、乙肝、衣原体、优生优育之后还能出现哪些大份额的产品，让我们拭目以待。

    n 国内领军企业仍没有出现
    目前，我国免疫层析诊断试剂的市场比较混乱，其市场格局可以用“群雄争霸，三国鼎立”来形容。由于免疫层析诊断试剂的品种门类极其繁复，涉及的领域也很广，因此，任何一家公司，想要包揽试剂的全部业务是不可能的。

    另外，快速诊断试剂市场巨大的赢利前景吸引产业界纷纷投资，其中有原先从事体外诊断试剂的厂家，有从事其它生物技术的厂家，有传统制药方式的药厂，甚至还有以前与生物技术无关的厂家。投资商有国内厂商，有国外企业，还有国外留学归国创业人员。值得关注的是，“非典”事件以后，已经有更多的上市公司进入到医疗快速诊断的投资领域。据统计，目前从事免疫层析诊断试剂开发生产的厂家已在30家以上。但是，由于对免疫层析诊断试剂产品产业化的特点认识不足，一些企业在可行性研究不足的情况下就纷纷上项目，在选项、立项上存在一定的盲目性，很快便造成了一些品种重复生产，产量过剩。由于产品的“同质化”现象比较严重，导致部分产品大打价格战，市场竞争激烈，以hCG和HBsAg两种产品尤为突出。这样，在短时间内，一些生产厂家虽可以获利，可时间一长，降价所获的利益就会丧失殆尽。低额的资金回报，使生产厂家没有充足的资金用于产品质量的再提高、项目的再开发，最终失去市场竞争力，形成恶性循环。

    另外，尽管国外免疫层析诊断试剂的价格高出国内同类产品好几倍，但在国内仍然占据一定的市场份额。巨大的利润使其有足够的资金可用于产品的促销，这就造成了我国诊断试剂市场的无序竞争。更恶劣的是，由于部分厂商以低廉的价格和不正当的营销手段销售其质量不佳的产品，甚至在市场上出现了“劣币驱逐良币”的现象。虽然众多厂商纷纷呼唤国家相关部门出台相关法规对市场予以规范管理，但目前仍然没有一个有效的文件。

    经过将近10年左右的发展，在我国，已经有艾康、爱德、万华、蓝十字、大卫等数家免疫层析诊断试剂厂家形成了一定的规模，但均是外资或合资企业，国内还没有相关企业能与之争雄 。值得一提的是，科华已经开始投身到胶体金领域。

    国内免疫层析诊断试剂产业优势分析：

    n 极佳的市场卖点 
    以胶体金为标志物的免疫层析体外诊断试剂在美国，欧洲等市场已经成为经典生物产业链条的一部分，成熟的市场操作经验和产品发展演变方向使国内企业可借鉴的东西非常多，目前，家庭疾病自检（Homelab）在美国已经非常普及，家庭测试市场已经有300种以上自我检验产品。自我检测使人们能够不需支付医疗费用和化验费用便可监视自己的健康状况。目前美国市场上Homelab产品市场规模约20亿美元，其中包括有筛检试剂，如从咽喉发炎到HIV感染的检测，亦有帮助追踪排卵期，或可检查青少年是否使用毒品，另有用于测试DNA来鉴定亲子关系的产品等。国内情况，随着社会的发展，生活水平的提高，人们要求社会保健机构能提供包括实验室检验在内的一系列更加完善的服务。要了解病人的身体状况和病情以确定治疗方案通常需要尽快获得检验结果，从而使病人尽早得到治疗。在某些情况下，传统的中心实验室（Lab Center）满足不了人们这种需求。值得一提的是，“非典”事件对国内的科普教育作用也使得快速诊断的地位被空前提升，事件营销的模式被最广泛的应用到了诊断试剂招商领域以及上市公司的股票运作上，并进一步加强了国家资金对抗体工程以及免疫诊断类产品的关注度。

    n 较短的投资回收期 
    虽然免疫层析诊断试剂的暴利时代已经结束（某些产品除外，比如成本1元的心肌钙蛋白I免疫层析试剂卡可卖到30.00元），但一般厂商的纯利润仍在20-50%，如果采购和销售渠道通畅，有的在50-100%甚至更高。）

    较少的投资成本和低廉的人力资源决定了免疫层析诊断试剂最适合在我国投资发展。放免、酶免、生化类、核酸类诊断试剂的在国内的市场已经成熟，其生产厂家逾百家，竞争激烈。新兴的生物芯片也有逾10家，而且投入较大，风险很大。唯独从事免疫层析诊断试剂的厂家相对较少。当然，这其中的技术差距是其中最主要的原因。

    随着我国加入WTO，上述诊断试剂，尤其是核酸类和生物芯片等诊断试剂在价格竞争力、新品开发、知识产权等方面受到外企的巨大冲击。相比之下，免疫层析诊断试剂所受的冲击就比较小（原因见下一节）。

    n 不可替代的人力成本优势
    目前免疫层析诊断试剂的生产的自动化程度不高，喷膜、切割、组装均是半自动化或手工为主。虽然，在国外已经出现全自动化的生产设备，但由于价格极其昂贵，而且相关辅料的供应尚不配套，因此，很少有厂家采用。因此，在免疫层析诊断试剂生产的各个环节，尤其是组装环节需要大量的人力。

    我国人力成本相对较低，这就大大降低了生产成本。在我国，人力成本约占整个生产成本的1/2，而在发达国家，人力成本在整个免疫层析诊断试剂生产成本中占了最重的比例，试剂材料的成本却只有10%以下。因此，加入WTO以后，进口试剂关税的降低对我国免疫层析诊断试剂不能造成很大的影响。虽然外资企业在中国直接设厂可以大大降低其人力成本，但维持其本土职员的人力成本仍然很高。由于关键免疫层析诊断试剂的原辅料耗材均是由国外进口，因此，提高生产效率，减低生产成本是我国所有免疫层析诊断试剂厂商提高其产品竞争力的关键。另外，虽然大多数的免疫层析诊断技术已经在国外获得专利，但对于年销售额在200万美元以下的企业，只要其产品不在美国销售，一般不征收专利费。

    国内免疫层析诊断试剂市场投资策略分析：

    胶体金免疫层析诊断试剂是在八十年代末九十年代初才开始蓬勃发展的高新技术产品，我国对免疫层析诊断试剂的研发还是在最近几年的事，免疫层析诊断试剂类产品才处于产品研发与生产的投入成长期，成熟期还没有到。免疫层析诊断试剂的诱人前景吸引国内众多公司（包括一些原先不从事诊断试剂开发的公司）积极加入这个行业中来。2000年以后，由于免疫层析诊断试剂巨大的发展潜力和盈利前景，众多的投资者纷纷加入到这一领域，形成了一个免疫层析诊断试剂的持续升温的开发热潮。这为免疫层析诊断试剂的发展注入了巨大的生命力，也创造了的空前繁荣，大部分投资者在很短的时间内名利双收，但也有少数投资者饱尝失败的辛酸。 

    那么，如何才能避免不幸，而在充满机遇与挑战市场空间里取得成功呢？其关键是投资者要清楚以下几点：（1）目标产品的市场需求；（2）目标产品的技术水平；（3）目标产品的投资准确估算；（4）目标产品与国际国内的政策关系；（5）目标产品的寿命和国际国内近期在类似产品中的研制状况。在上述的五点中，目标产品的技术水平，尤其是企业现实的技术水平尤为重要，它对企业来说是一个生死攸关的大问题。我国免疫层析诊断试剂产业发展较发达国家晚，技术水平相对也较落后。国内产品与进口同类产品在质量的稳定性、操作的方便性等方面存在着较大的差距，因而进口的免疫层析试剂诊断盒占据了大部分市场份额。而且，随着免疫层析诊断试剂产品的技术含量越来越高，国外产品被国内企业仿制的可能性大为减小，竞争壁垒大大提高。如采用magnetic particle标记目前只有美国Quantum Design公司独自采用，UPT技术只有OraSure Technologies公司应用等等。

    由于免疫层析诊断试剂在形式上要比放免、酶免都简单的多，所以许多投资者在投资的初期没有意识到在简单的形式下所掩盖的高科技含量。由于免疫层析诊断试剂是在放免、酶免的技术上发展起来的，其发展相对较晚，可以借鉴的技术文献也相对较少，所以其开发难度要比二者高。另外，有些投资者在开发的起初阶段就从上游开发，而上游技术是我国的软肋，这就增加了投资的风险程度。虽然，有的厂商完全从上游成功的开发出一两个产品，但由于其开发时间长，产品种类较少，在市场上仍然难以占有优势。因此，最可行的投资方案是直接从下游开始，以最短的时间开发出系列产品，在占有市场和技术成熟的条件下，再从事上游工作。技术的不断进步是企业的发展的源动力，另一方面,我国免疫层析诊断技术的产业现状决定了在短时间内不可能赶上发达国家，因此，国内企业也必须时刻追踪诊断技术的发展。

    免疫层析诊断试剂由于具有投资少、竞争小、周期短、市场广阔等特点，而且受到国家相关部门大力扶植，是一个较好的医药生物技术产业化领域。但投资仍然有一定的风险。投资商需要具备以下三个重要的前提下方可投资：（1）顺畅的国外（设备及抗体和膜等）购货渠道；（2）过硬的技术基础；（3）系列化的优质的产品。相反，企业的土建、人力成本以及生产设备在整个投资中的地位却是微不足道的。另外，遵循国际规则，实施GMP、ISO9000、FDA、CE类认证，是将产品打入国际市场的通行证；建立良好的营销模式以及与医药商业企业的建立战略联盟是迅速将产品占领市场的必需途径。实践表明，在国外设立研发中心以提高企业的研发能力和稳定原料供应，在国内设立生产基地以利用低廉的人力资源是国内企业比较可行的发展途径。

三、胶体金试剂及抗原、抗体试剂

    n 胶体金试剂

    胶体金试剂：派坤生物提供含10-65纳米粒径的胶体金的试剂。这些试剂的标准配方为浓度10-12个OD单位，波长540nm。我们以粒度为10个OD单位的溶液为标准来计价,其余浓度,大小的配方可以根据客户的要求定制。　

    什么是胶体金?

    胶体金是一种不具有特定结构的原子，由Gold Chloride还原而成；不同还原剂可调控胶体金颗粒形成的大小，而不同颗粒大小的胶体金会有不同的应用。

    因为具有强稳定性，胶体金标记法在80年代后期被引入到快速诊断试剂中。不同大小的胶体金都可以在特定的条件下制备出来，大小不同其用途也不一样。由于胶体金可见性和空间位阻的平衡关系，胶体金免疫层析试剂大都选用40nm的胶体金作为它们的标记物。目前生产40nm胶体金的方法都是化学还原法，将1％柠檬酸三钠加入沸腾的0.01%氯化金水溶液中就能生产出想要的胶体金溶液。虽然看似简单，但要生产出单分散的胶体金是很难做到的。

    胶体金的产生过程包括晶核生成和晶核生长。加入还原剂后的短时间内，溶液中的金原子含量直线上升并达到过饱和状态。这时金原子开始生成由11个原子构成的中央二十面体晶核。为减少溶液中过饱和的金原子，晶核构架形成得非常块。一旦晶核形成，溶液中剩余的金原子依据能量递减梯度继续结合到晶核上。

图7. 胶体金的产生过程示意图

    影响胶体金质量的因素主要包括：反应物的浓度、反应物搅拌混匀程度、反应物加料顺序、反应温度和反应器的材料。其中反应物搅拌混匀因素是最让人头疼，也是至关重要的一个因素。因为溶液中的金原子在很短的时间内被还原生成，并且很快的形成晶核，所以如果不能在很短的时间内将加入的还原剂混合均匀，很容易会得到不均一的胶体金溶液。这个问题在大批量生产中尤为突出。   

    为何使用胶体金? 

    胶体金悬浮于溶液中，带有部分金属的特性，会被溶液中负价离子包围；举抗体为例，抗体极容易因为带电性与胶体金结合，形成稳定的结合物。以胶体金标定的抗体，因为金原子的特性，其敏感度、稳定度、专一性与再现性都较染剂标定为高。也由于胶体金具有如此优越的特性，在1980年代晚期开始应用在需要高专一性及稳定度的快速诊断试剂上。派坤生产的快速诊断试剂即运用胶体金做高专一性的免疫呈色。

    如何选择好的胶体金?

图8. 好的红色胶体金和不好的紫色胶体金

    虽然60nm胶体金颗粒可以应用于快速诊断分析，但实际上很少应用于快速诊断分析。60nm胶体金颗粒与40nm胶体金颗粒的颜色稍微不同。优质的40nm胶体金为鲜红色，而60nm胶体金为深粉红色。如上图所示，品质优良的胶体金溶液会绽放出樱桃红色，且胶体金原子各个呈现圆球形；劣质胶体金溶液则是紫黑、紫红色，而胶体金原子呈现不规则的形状。 

　　派坤自制的胶体金颗粒大小一般为20nm和40nm，可适用于免疫标定、分子检测及生物芯片等实验，可结合在DNA、抗原及抗体等蛋白质上做呈色之用。   

    　　　　　　　　　　　　　　　　图9. 派坤生物自制胶体金示意图

   　　　　　　　　　　　　　　　　 规格：100 ml, 500 ml

   　　　　　　　　　　　　　　　　 金粒子平均直径：2-80 nm

   　　　　　　　　　　　　　　　　 Gold Chloride浓度：0.01%（w/w）

    　　　　　　　　　　　　　　　　金粒子纯度：99.9%

   　　　　　　　　　　　　　　　　 保存方式：2-8℃，不要冷冻    

  n 胶体金标记代制服务

　　蛋白标记胶体金的实验方法很简单，只需将两种溶液混合在一起，既简单又容易。但是蛋白结合到胶体金上的化学和物理过程是很微妙的，如果不清楚其中的过程，很可能会造成金标结合物不稳定，容易结块，导致最后的产品出现稳定性和特异性的问题。

　　蛋白是被动地结合到胶体金上，是一个物理过程。这整个过程中主要有三种作用力起作用。（1）静电作用：金颗粒的最外层是带负电荷的，会和蛋白的正电荷区结合，因而使蛋白结合到胶体金表面上；（2）疏水作用：金颗粒除了带负电荷，它本身还是疏水性胶体，因而蛋白还能通过疏水作用和胶体金结合；（3）金硫键：金和蛋白中的硫共用电子对，能产生很强的作用力。

　　由于蛋白和胶体金之间主要由上述三种作用力维持，因而在金标的缓冲液中避免加入会破坏这些作用力的物质，比如避免使用高盐缓冲液、表面活性剂和含有巯基或汞的防腐剂等。胶体金标记抗体时，不能有过量的待标记抗体存在。因为过量的游离的抗体会跟胶体金上的抗体与抗原发生竞争反应，导致出现假阴性，而且过量的抗体蛋白还会影响到金标的稳定性。蛋白质和胶体金结合的最佳条件在蛋白质的等电点附近或略高于等电点。这样蛋白的净电荷为0或偏负，从而避免了因静电作用而引起聚集。

　　一旦蛋白结合上胶体金，必须使用BSA、凝胶、聚乙二醇或酪蛋白稳定金标溶液。这些稳定剂不仅能封闭胶体金表面未和蛋白结合的位点而减少了非特异性反应，还能提供一种更稳定的悬浮液。

    派坤生物可提供胶体金结合蛋白(抗原、抗体等）的胶体金标记代制服务。可根据您的要求对抗体、抗原或半抗原偶联物进行胶体金标记，并帮助您建立标记工艺条件优化的试验模式。

图10. 胶体金标记抗体用于免疫层析实验的原理

　　其他标记服务还包括辣根过氧化物酶（HRP），荧光素（FTIC）及生物素（Biotin）等，一般是以共价键和离子键的方式连接到抗体或抗原蛋白分子上，制备成高度灵敏和特异性的分子探针，可用于 临床诊断学、医学病理学、免疫组织化学、分子生物学、生物制药与兽医药研究等领域的分析研究与技术测定。

    如需要进一步信息，随时欢迎致电派坤生物，我们将很乐意为您服务。

   n 抗原和抗体试剂

    单克隆抗体：派坤生物提供的单克隆抗体试剂均使用胶体金 标记进行过相应的诊断试剂功能性质量鉴定。以下试剂可以进行大批量的供货，以便保证您产品质量的均一性和稳定性。

　　- McAb-β-hCG
    - McAb-hCG
    - McAb-AFP(Type I)
    - McAb-AFP(Type Ⅱ)
    - Chlamydia Trachomatis(Type I)
    - Chlamydia Trachomatis (Type Ⅱ)
    - Anti-Chlamydia Trachomatis
    - Mouse Anti-chicken IgY
    - McAb -mycoplasma　
    - McAb-H. Pylori
    - Anthrax LF antibody
    - IFN-ω Monoclonal antibody
    - IFN-ω Antibody
    - 2.5S (NGF) Monoclonal Antibody
    - rh-GM-CSF　
    - McAb -dsDNA
    - McAb -RNA
    - McAb -cDNA
    - McAb -DNA-RNA
    - McAb-hIgG
    - McAb-hIgM
    - McAb-hIgA　
    - McAb-hIgE
    - Goat Anti- Mouse IgG
    - Goat Anti- Human IgG
    - McAb-hIgG-HRP
    - McAb-hIgM-HRP  
　　- McAb-MET
　　- McAb-AMP
　　- McAb-COC
　　- McAb-THC
　　- McAb-BZO
　　- McAb-BAR
　　- McAb-MDMA
　　- McAb-MTD
　　- McAb-ACE
　　- McAb-TCA
　　- McAb-KET

　　n 细胞融合与单克隆抗体制备

    派坤生物已建立了细胞工程室、生化室，从美国引进了液相提取仪，低温高速离心机，二氧化碳孵箱，超净工作台、倒置显微镜、CO₂培养箱、纯水装置、酶标仪等仪器设备。可根据客户的不同需要提供经济、快速而可靠的单克隆抗体制备的完整解决方案，本项技术服务包括：
    - Balb/c纯系小鼠免疫；
    - 脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的融合；
    - 抗体产生细胞的ELISA筛选；
    - 抗体产生细胞的亚克隆与扩增；
    - 指定细胞克隆的体外培养或腹水瘤接种法生产单克隆抗体。

    多克隆抗体制备：派坤生物可为您提供快速、高质量和经济的多克隆抗体制备服务，并将通过严格的抗体质量评估体系成为您在科研及生产中的得力的助手。 胶体金诊断试剂研发和生产常用的多克隆抗体（主要包括：羊抗鼠IgG多抗，羊抗兔IgG多抗，羊抗人IgG多抗）可大量供货。

图11. 单克隆抗体和多克隆抗体的制备

    n 基因重组抗原

    HIV基因工程抗原：最早在HIV抗体免疫测定中所使用的抗原为用去垢剂裂解HIV感染的细胞后所提取的病毒抗原，这样得到的抗原纯度相对较差，因此影响测定的特异性和敏感性。现在国内外用于HIV抗体检测的酶联免疫吸附试验（ELISA）和胶体金免疫层析试验均使用基因工程抗原如gp41,gp120,gp160等，大大提高了测定的特异性和敏感性。

　　基因工程抗原对建立高灵敏高特异的免疫测定方法具有不可替代的作用，已成为难以培养的病原体抗原的最佳来源，亦解决了病原体裂解提取抗原纯度差的问题。

　　派坤生物出品的各类基因重组抗原批间差极小，采用全自动发酵罐和全套进口柱层析设备以及真空冷冻干燥设备，可大批量供货，并具有高度的特异性、敏感性和稳定性。公司开发生产的各类基因工程重组抗原产品已经占据了中国诊断试剂抗原原料行业相当的市场并已成功打入加拿大市场。

图12. 天津大学-派坤生物联合实验室全自动发酵罐

    目前派坤主要应用于医学免疫诊断领域的重组抗原，主要包括艾滋病、丙肝、乙肝、梅毒以及其他多种疾病的免疫诊断用基因工程抗原：

    - 基因重组HBeAg
    - 基因重组HBcAg
    - 基因重组HCV
    - 基因重组TP-17
    - 基因重组TP-47
    - 基因重组TP-62
    - 基因重组TOX
    - 基因重组CMV

    n 多肽抗原合成

    派坤生物可以为您提供多肽抗原设计以及多肽抗原合成、多肽抗原耦联（BSA、KLH）服务。可以提供毫克至克级多肽抗原合成及纯化服务，并以具有足够竞争力的价格满足客户需求。采用国际先进的多肽固相合成仪以及 优化的Fmoc固相多肽合成技术，使用制备级HPLC对产物进行分离纯化， 使用电泳和HPLC两种手段进行多肽纯度的鉴定，具有产品纯度高、制备量大、合成步骤质量可控的特点。本公司为生产的多肽产品提供纯度分析的HPLC色谱图。 

    多肽抗原设计：为产生有效的抗体,第一步是设计好的抗原,此抗原可以来源于整个蛋白质的一部份:一个或几个抗原决定簇区域的序列。一旦抗原序列决定后,接下来就是设计所需合成的多肽了,设计时除了注意其序列外,同时应考虑一些产生免疫机制的问题,如:
    - 载体蛋白的接入位置；
    - 如果其序列是位于蛋白C端的,此多肽C端一定是自由的羧基团,而N端被掩盖.同时如果载体蛋白是通过半胱氨酸偶联，此半胱氨酸应处于N端位置，使C端完全暴露给免疫系统；
    - 相反，如果其序列是位于蛋白质N端，此多肽C端应掩盖，暴露出N端，而载体蛋白应在C端。

    多肽合成方法研究抗原表位：将抗原偶联胶体金也面临不同的技术难题。将常见的蛋白质抗原偶联上胶体金比较容易，但前提为结合到抗原上的胶体金对蛋白质抗原决定簇的影响小于50％。因此，免疫金和蛋白质结合方式对研发人员非常重要。此外，与胶体金颗粒偶联相关的氨基酸残基在蛋白质中适合的定位对于达到最佳的检测灵敏度非常重要。就标记抗体来说，这些氨基酸应定位于Fc区，而对于标记抗原，它们应远离抗原的反应决定簇位置。

图13. 抗体与胶体金结合的机理图

   根据DNA序列，推导出氨基酸序列，系统地合成每一段小肽，利用抗体或抗血清来检测能起阳性反应的片段，以获得抗原决定簇。假定推导出来的氨基酸序列是ABCDEFGH......XYZ，从A开始，系统地合成6肽，即为ABCDEF，BCDEFG，CDEFGH，DEFGHI，......然后进行斑点免疫试验或免疫层析试验，能起阳性反应的片段可认为是抗原表位，根据我们的经验，以6肽合成多肽预测抗原决定簇精确度最高。

　　n 小分子半抗原偶联

    目前，小分子免疫层析在检测毒品方面已经得到广泛的应用，并且初步应用在食品安全和激素检测上。1996年，Mika P.A.等首次应用竞争免疫层析检测牛奶中的孕酮以来，研究小分子胶体金免疫层析的文章日益增多。随着小分子胶体金免疫层析的优点被人们逐渐了解，潜在的优势逐渐被挖掘，它还将会进入更加广泛的领域。但是胶体金竞争免疫层析的低灵敏度和不能定量的不足，使得它的应用受到很大的影响。因此灵敏度的提高和定量的实现，将是胶体金竞争免疫层析实行广泛应用的关键，也是将来研究的重点。

　　用竞争法检测小分子中，因小分子物质不能直接和胶体金结合，所以只能先将小分子或类似物偶联在大分子蛋白质上，如BSA、OVA等，然后才能让胶体金标记上。一般说来，蛋白分子中可以用于交联的活性基团有游离氨基、游离羧基、苯基、酚基、巯基、羟基、咪唑基、吲哚基或胍基等。其中用的最多的是游离的氨基，氯霉素和BSA的偶联就是通过戊二醛将氯霉素上的氨基和BSA上氨基连接。但是绝大多数的小分子都没有直接和BSA连接的基团，这就需要先在小分子上连接一个－COOH或－NH2，再和蛋白偶联。为了避免蛋白质变性及其生物活性的损失，半抗原等与蛋白的交联应采用具有中等反应活性的试剂，在温和的条件(如接近中性的pH、室温、水溶液中)进行。　　

    半抗原偶联物与抗体的匹配：小分子竞争法检测中，免疫原（或半抗原偶联物）合成中所有的蛋白质连接技术都可以根据不同的半抗原 分子结构，标记物或载体蛋白选择，按照客户的具体要求进行，也可以通过修改其强度，位置和链接程度使其与现有的国内外抗体相匹配。 我们同样可以通过胶体金标记抗体以及半抗原偶联物固定NC膜的方法进行两者的快速匹配实验，该项目的收费根据您不同的要求而定，请向本公司查询具体报价。

    n 生物试剂纯化及鉴定

    派坤生物在抗体等蛋白质的纯化方面具有极强的设备和人员优势，可为检测所需的单克隆抗体，多克隆抗体和抗原结合剂进行纯化。通过对客户进行深入咨询，我们针对您的实际运用情况，帮助您开发出能达到理想纯度，产量和成本的最好方法。

图14. 天津大学-派坤生物联合实验室制备级反相-HPLC

    所有的试剂在投入使用前都通过我公司的功能鉴定和标准的质量鉴定。无论是成品销售还是半成品销售,我们从原材料开始就进行严格的质量检验和质量控制。为保证您的产成品的一致性，我们可以提供大批量的试剂。

图15. 天津大学-派坤生物联合实验室分析型反相-HPLC

   值得一提的是，天津大学-派坤生物联合实验室率先在国内引进了库仑阵列电化学液相色谱仪，ESA库仑阵列电化学检测器是目前唯一可用于梯度HPLC的电化学检测器，并可提供梯度基线修正；使用范围大，不必进行荧光检测时的必须性衍生；可以穿过通道的信号比估算峰纯度；自动量程修正增强控制能力；ESA582型泵的控制可选择梯度和非梯度配置；提供三维图谱（时间、电势和浓度曲线）等优点。

图16. 天津大学-派坤生物联合实验室电化学库仑阵列检测器-HPLC

    该仪器在对复杂生物样品及痕量样品定性定量分析方面有着独特的优势，并且应用极其广泛，检测范围包括：天然产物分析、中药现代化研究，指纹图谱的建立；药物代谢分析、抗氧化物分析，神经递质分析等；癌症、心血管疾病、成神经细胞瘤、阿尔茨海默症等疾病的早期诊断；食品、饮料、农业等的产品质量和原材料控制；环境荷尔蒙，农药残留等环境污染物的检测。该仪器的引进以及成功的应用于瘦肉精、沙丁胺醇、四环素等胶体金免疫层析试剂盒的定量对照研发过程，标志着天津大学-派坤生物联合实验室在仪器定量检测和胶体金免疫层析试剂盒的产品研发方面已达到国际先进水平。
                                                                                                    

四、胶体金免疫层析试剂技术咨询、培训

    n 项目可行性研究

    派坤生物可以提供从胶体金的制备、标记、纯化、包被，样本垫的处理、结合垫的处理、硝酸纤维素膜的包被等一系列技术培训及咨询服务，并可按照客户要求进行胶体金免疫层析新产品的可行性研究。

    对于那些已对某种检测方法(比如植物病毒、细胞因子等)正在构思但尚未完善的客户,本公司可提供可行性研究服务,这项服务可以很快的帮您确定胶体金免疫层析技术与该测试方法是否适合,同时也可由我方市场人员提供产业化前景的分析和咨询。有了此项服务，客户就不需自行研究，自行开发技术及购买开发和生产必需的设备。这项服务也可以和技术转让项目结合起来。本公司的技术人员已经开发了传染病，优生优育，激素，药物滥用和环境测试、食品安全检验等方向的各种快速检测方法和建立起一整套“金标准”的仪器分析模式，并且具备完备的样本库和标准品库，因此现有标准品和临床样本的项目可行性研究在两个星期内即可完成。

    n 技术咨询、培训     

     该项目特别适合于已经拥有部分产品或希望立即拥有生产能力的业内人士，内容包括产品的现场演示、产品的试行生产、标准操作程序（SOP）的使用等。该项目是以实践为主，并帮助企业建立生产及质量控制的标准，本公司的技术人员将向您教授胶体金的制备、标记、纯化、结合垫的包被，膜的包被，样品垫的处理，试剂盒的组装等一全套研发及生产工艺。由派坤生物的教授专家在天津大学生命科学与工程研究院的POCT产业示范基地亲自进行现场培训，直至贵公司能熟练生产出合格的产品为止。胶体金产业的OEM特点决定了该产业注定要进一步分工，针对某一个工序的培训，比如胶体金制备厂家如何进行连续大规模生产和质量控制，大板分切厂如何进行有效的质量控制等，您可以根据现有的技术水平选择以下培训项目：

    1 胶体金免疫层析诊断试剂生产和研发所需要的一整套硬件设备，包括喷膜机（生产型和研发型）、国产切割机、封口机、喷码机、真空干燥机等。以上设备均已经由派坤生物科研课题组在生产实践中不断改进，适合国内生产实际需要，并可根据生产规模加以调整。 

    2 所有原材料、试剂的供应及价格，包括硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫、吸收垫，国产试纸条的塑料垫片、干燥剂、一次性吸管、包装袋、抗原/抗体、所有生化试剂等。以上耗材均经过派坤生物优化筛选，可以大大降低您在开发新产品时的工作量。

    3 我们还将帮助您建立一整套胶体金免疫层析诊断试剂生产的标准操作规程（SOP），以便贵公司能够更迅速的进行生产许可和批准文号申请进而及时抓住市场商机。该管理体系的研发部操作规程（这里简单以通用的的“金标垫一次浸泡法”为例）主要包括：

     - 包被稀释液的的配制规程；

     - 包被液稳定剂的配制规程；

     - 包被液螯合剂的配制规程；

     - 包被液生色剂的配制规程；

     - 检测线包被溶液的配制规程；

     - 质控线包被溶液的配制规程；

     - 硝酸纤维素膜的包被规程；

     - 氯金酸溶液的配制规程；

     - 胶体金（20纳米）的制备以及质量鉴定规程；

     - 胶体金（40纳米）的制备以及质量鉴定规程；

     - 胶体金标记调试液的配制规程；

     - 胶体金洗涤液配制规程；

     - 胶体金封闭液的配制规程;

     - 胶体金标记及纯化规程；

     - 胶体金稀释溶液母液Ⅰ的配制规程；

     - 胶体金稀释溶液母液Ⅱ的配制规程；

     - 胶体金稀释溶液母液Ⅲ的配制规程；

     - 胶体金稀释溶液母液Ⅳ的配制规程；

     - 胶体金稀释溶液的配制规程；

     - 胶体金的包被溶液的配制规程；

     - 样品垫处理缓冲液母液的配制规程；

     - 样品垫处理缓冲液的配制程序及样品垫的处理规程；

     - 标准品稀释溶液的配制规程；

     - 标准品的配制规程；

     - 产品的质检规程；

     - 产品使用说明书　

    另外，在培训中派坤生物的技术人员将结合实践及标准操作程序向您介绍胶体金免疫层析技术的原理，以利于您理解和跟踪胶体金免疫层析技术的进展。其主要内容如下：

     - 胶体金免疫层析诊断试剂组分功能及优化；

     - 胶体金在免疫层析诊断试剂中的应用；

     - 胶体金免疫层析诊断试剂的检测原理及生产设备；

     - 胶体金免疫层析诊断试剂的加速稳定性测试；

     - 胶体金免疫层析诊断试剂的质量控制体系；

     - 胶体金免疫层析诊断试剂的研发体系；

     - 胶体金免疫层析诊断试剂假性结果的解决；

     - 免疫层析诊断试剂的进展；

     - 全血免疫层析检测技术 

    　请向本公司查询以上技术咨询和培训服务的价格。                                                 

五、胶体金免疫层析试剂委托研发和技术转让 

    派坤生物通过国外成熟项目的直接引进和吸收，结合原有天津大学基因工程中试基地的整体技术优势，不断开发出适合国内医疗体外诊断试剂市场实际需要的胶体金系列产品。本公司宗旨是：联合国内体外诊断试剂企业，共同推进诊断产业的发展，促进国内诊断行业的技术升级。鉴于此，本公司向国内药品生产企业和传统诊断试剂生产企业提供胶体金免疫层析产品委托研发和技术转让服务。项目包含激素类、感染性疾病、滥用药物、肿瘤标志物、心肌损伤标志物等五个系列逾二十几个种类的产品，产品的质量已达到国际市场上销售的同类产品的质量水平。现阶段重点推介的项目如下：

     - 唐氏综合征（Down’s Sydrome） 产前筛查系列；

     - 衣原体（CHLA）抗原 性病系列；

     - 心肌钙蛋白I 心肌梗死多项联检；

     - 抗精子抗体 不孕不育系列；

     - 乳腺癌标志物CA153 癌症标志物系列；

     - k粉 毒品系列；

     - 青霉素 抗生素系列；

     - 牛早孕(融资合作) 

     胶体金免疫层析诊断试剂具有投资少、竞争小、周期短、市场广阔等特点，而且受到国家相关部门大力扶植，是一个较好的医药生物技术产业化领域。相信派坤生物的技术服务能帮助您提高原有国产产品质量，开发出适销对路的新产品，拓展您的产品门类，从而协助您达到国内体外诊断试剂行业内技术领先水平。      

六、胶体金免疫层析试剂OEM委托生产及供应大板

1 派坤生物可为您提供各类胶体金免疫层析产品大板

- 品种:毒品、法医、传染病、肿瘤、心血管疾病、激素、优生优育、食品安全等

- 生产培训:切条机使用及切割分装生产条件

2 进口或国产胶体金耗材、原料

- 处理好或未处理NC膜

- 处理好或未处理样品垫（玻纤）

- 处理好或未处理金标垫（聚脂）

- 吸水纸

- 片材

- 测试盒（可定制）

- 取样管

- 滤血膜

3 胶体金生产及研发设备：

- 切条机

- 点膜机(连续生产型)

- 喷金标机

- 贴膜机

- 自动装配机

4 胶体金技术服务

- 派坤生物可以根据客户的需求为你解决任何技术问题，产品具有良好的可靠性和稳定性。

- 可根据客户的要求制备特殊的单克隆抗体（抗原可由客户提供,小分子半抗原可以直接交给派坤进行蛋白质偶联）。

- 可为客户选择具有市场前景的胶体金项目。

  请致电 派坤热线:(86-21)51098851,我们将有专人为您24小时服务；

  或 传真至天津大学-派坤生物CRO技术服务专线:(86-22)27409598

  还可以方便的发送电子邮件至 info@3i.com.cn，我们都有专人为您服务。

图17. 胶体金免疫层析试剂盒的半成品（大板）结构图

　　针对以下临床和公安、法医、食品安全类胶体金免疫层析检测产品，派坤生物诚招经销代理并接受OEM委托生产并可提供大板，配合派坤专门的切割分装设备即可马上投入生产，这样将极大的降低刚起步的诊断试剂公司的入门风险。本公司愿与国内营销伙伴以及国内外OEM客户形成休戚相关、共同成长、利益双赢的合作局面 。

     - 心肌钙蛋白I（cTnI)检测卡试剂条（卡）；

     - 唐氏综合征（Down’s Sydrome）检测试剂条（卡）；

     - 全血TORCH（弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒）4 IgG/IgM 检测试剂条（卡）；

     - 全血TORCH 5 IgG/IgM 检测试剂条（卡）；

     - 沙眼衣原体（CHLA）抗原检测试剂 条（卡）；

     - 解脲支原体（UU）抗原检测试剂条（卡）；

     - 全血胃幽门螺旋杆菌(HP)抗体检测试剂条（卡）；

     - 全血艾滋病（HIV 1/2）抗体检测试剂条（卡）；

     - 全血梅毒（Syphilis）检测试剂条（卡）；

     - 全血乙肝表面抗原（HBsAg）检测试剂 条（卡）；

     - 全血乙肝表面抗体（HBsAb）检测试剂条（卡）；

     - 肺炎支原体（MP）检测试剂条（卡）；

    - 肺结核（TB）检测试剂条（卡）；

     - 甲型肝炎IgM抗体（HAV IgM）检测试剂条（卡）；

     - 丙型肝炎IgM抗体（HCV IgM）检测试剂条（卡）；

     - 人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测试剂条（卡）；

     - 人促黄体素（LH）检测试剂条（卡）；

     - 人卵泡刺激素（FSH)检测试剂条（卡）；

     - 人前列腺特异抗原（PSA)检测试剂条（卡）；

     - 人血红蛋白（Hb)检测试剂条（卡）；

     - 吗啡（阿片类如海洛因）检测试剂条（卡）；

 　　- 安非他命（摇头丸的成分）检测试剂条（卡）；

     - 甲基安非他命（冰毒）检测试剂 条（卡）；

     - 亚甲基二氧甲基－安非它命（摇头丸）检测试剂条（卡）；

     - 大麻检测试剂条（卡）；

     - 可卡因检测试剂条（卡）；

     - 氯胺酮（K粉）检测试剂条（卡）； .

     - 苯二氮卓检测试剂条（卡）；

     - 巴比妥检测试剂条（卡）；  

　　相信派坤生物的OEM服务能帮助您迅速进入胶体金法体外诊断试剂市场领域，拓展和完善您已有的产品类型或种类，培养和壮大POCT销售团队和扩大销售渠道。国内外贸企业通过OEM也可以充分利用起本土研发和人力成本优势，不断开拓新兴生物技术领域的国际市场，将国内的胶体金产品直接嵌入到更广阔的国际医疗诊断产业链条中去。